Pneumonectomie du lobe pulmonaire gauche chez la souris -Modèle de croissance pulmonaire in vivo

PROCEDURE

– Peser l’animal afin d’opérer des animaux pesants entre 20 et 25g.

– Injecter en injection intrapéritonéale ip. le volume du mélange d’anesthésiques (10µl/g) nécessaire en fonction du poids de la souris (Buprénorphine® 1mg/kg, Zoletil® 160mg/kg, Xylazine® 10mg/kg).

– Raser l’animal au niveau du flanc thoracique gauche.

– Intuber par voie orotrachéale l’animal à l’aide de la sonde (Schéma de la figure 01).

– Vérifier la bonne réalisation de l’intubation en connectant rapidement l’animal au respirateur Minivent® (débit de 150µl/min ; volume courant de 100µl).

– Les mouvements thoraco-pulmonaire confirmerons l’intubation intra-trachéale grâce au flux d’air entrant et sortant dans les poumons.

– Placer la souris en décubitus dorsal sur le tapis chauffant.

– Appliquer une pommade ophtalmique (Ophtocyline®) sur la cornée de la souris pour éviter son dessèchement

– Raser la zone cutanée du flanc thoracique gauche puis désinfecter avec de la Vétédine.

– Procéder à l’ouverture de la peau sur un cm.

– Ecarter les muscles pour apercevoir le flan musculaire du thorax gauche. Ecarter les muscles intercostaux jusqu’à l’apparition des espaces intercostaux.

– Inciser le muscle au niveau du 4^eme espace intercostal sur 1cm dans le sens antéro-postérieur.

NB : Une vidéo en annexe reprend les gestes à suivre pour la réalisation, par un personnel initié à la microchirurgie thoracique, de la pneumonectomie suivie du réveil de la souris.

– Bien repérer le hile (ensemble veine, artère et bronche) du lobe pulmonaire gauche

– Passer le passe fil munit du fil de soie 6-0 selon un mouvement au tour du hile (Figure 01-b).

– Réaliser avec ce fil un double nœud suivi d’un nœud de blocage définitif (Figure 01-c).

– Extraire entièrement le poumon sur le flanc thoracique gauche (Figure 01-d).

– Couper à l’aide des micro-ciseaux le hile juste devant la ligature (Figure 01-e).

– Introduire une mèche de compresse pour enlever l’excès du fluide dans la cavité thoracique (Figure 01-f).

– Réaliser un point chirurgical dit en « U » avec du fil Prolène® 6-0 sans le serrer.

– Placer un tube en polyéthylène monté sur une seringue de 1mL.

– Installer le bout distal de ce tube, sur 1cm, dans la cavité thoracique gauche.

– Serrer le point en « U » afin de rapprocher la 4^ème et la 5^ème cote.

– Réaliser le vide pleural en aspirant à l’aide de la seringue un volume de 200µL.

– Serrer le nœud en U tout en retirant simultanément le tuyau en polyéthylène.

– Réaliser des nœuds en points séparés sur les deux flancs de la peau avec du fil prolène® 6-0.

– Traiter avec de la Vétédine® pour éviter toute infection ultérieure.

– Vérifier si la souris manifeste une résistance à l’assistance respiratoire au bout des 10 premières minutes.

– Débrancher l’animal du respirateur.

– Au bout de quelques secondes l’animal reprend une respiration spontanée.

– Enlever la sonde d’intubation de la souris.

– Réaliser une injection intrapéritonéale de 200 µl de la solution : 5µl de buprécare dilué dans 500µl de NaCl 0.9%.

NB : Ce traitement permet de minimiser la douleur ressentie par la souris et sa réhydratation.

– Placer la souris dans la chambre de réveil chauffée à 27°C avec un apport en oxygène à 100%.

– Une fois la souris réveillée, la replacer dans une cage avec de l’aliment imbibé d’eau dans le fond de sa cage.